光照對(duì)水中葉綠素含量檢測(cè)的影響，是一項(xiàng)至關(guān)重要卻又常被忽視的技術(shù)前提。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性與可靠性，不僅取決于儀器本身的精度，更與光照這一貫穿采樣、處理、儲(chǔ)存乃至檢測(cè)全過(guò)程的變量密切相關(guān)。不當(dāng)?shù)墓庹湛刂?，足以令最精密的測(cè)量偏離真實(shí)值，其影響機(jī)制是多層次且深刻的。

目前，對(duì)戶外水質(zhì)葉綠素含量檢測(cè)，比較行之有效的設(shè)備是便攜式葉綠素測(cè)定儀，一機(jī)多能，可以檢測(cè)包括葉綠素在內(nèi)的數(shù)十種水質(zhì)參數(shù)。

在樣品采集與初始處理階段，光照條件直接作用于水體中浮游植物的生理狀態(tài)。葉綠素a作為光合作用的核心色素，其細(xì)胞內(nèi)含量并非恒定不變，而是隨光照強(qiáng)度發(fā)生動(dòng)態(tài)調(diào)整。在強(qiáng)光環(huán)境下，藻類細(xì)胞可能啟動(dòng)“光適應(yīng)”機(jī)制，單位細(xì)胞內(nèi)的葉綠素a含量會(huì)暫時(shí)性降低，以規(guī)避光損傷；反之，在弱光條件下，細(xì)胞則可能合成更多葉綠素以捕獲光能。若采樣過(guò)程未對(duì)光照進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化控制（例如，統(tǒng)一在特定光照時(shí)段或使用避光采樣器），所獲樣品中葉綠素的初始濃度即已失真，不能代表水體的真實(shí)平均生物量。此外，樣品暴露于強(qiáng)光下，會(huì)顯著加速藻類細(xì)胞的代謝乃至死亡裂解，導(dǎo)致葉綠素在測(cè)定前便開(kāi)始降解。

其次，也是最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)在于，光照會(huì)直接引發(fā)樣品中葉綠素分子的光化學(xué)降解。葉綠素是一種對(duì)光極其敏感的光敏分子，尤其在富含氧的水體環(huán)境中。當(dāng)樣品在運(yùn)輸、保存或前處理過(guò)程中受到持續(xù)光照，特別是紫外及高強(qiáng)度可見(jiàn)光照射時(shí)，葉綠素分子的卟啉結(jié)構(gòu)會(huì)吸收光子能量，發(fā)生不可逆的光氧化反應(yīng)。這個(gè)過(guò)程導(dǎo)致葉綠素a降解為無(wú)熒光或無(wú)特征吸光度的產(chǎn)物，從而使后續(xù)檢測(cè)的測(cè)定值系統(tǒng)性偏低。這種降解速率受溫度、溶解氧和光照強(qiáng)度的共同影響，在夏季高溫、高氧、強(qiáng)光條件下尤為劇烈。

在具體的檢測(cè)方法層面，光照的干擾以不同形式存在。若采用熒光分光光度法，該方法的原理即是利用特定波長(zhǎng)的光激發(fā)葉綠素a產(chǎn)生熒光。然而，若樣品在提取后或測(cè)定前經(jīng)歷不當(dāng)光照，目標(biāo)色素已部分降解，其熒光強(qiáng)度將直接減弱，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果顯著偏低。更復(fù)雜的是，某些葉綠素的降解中間產(chǎn)物可能產(chǎn)生背景熒光，干擾特異性測(cè)定。若采用高效液相色譜法，雖然分離能力強(qiáng)，但樣品前處理過(guò)程中的光照降解同樣會(huì)使進(jìn)入色譜柱的目標(biāo)物峰值面積減小。

即便是現(xiàn)場(chǎng)使用的活體熒光儀，其測(cè)定值反映的是“原位”光照歷史下藻類的表觀葉綠素含量，其讀數(shù)本身就包含了藻類光適應(yīng)狀態(tài)的信息，且儀器激發(fā)光源本身也可能在瞬時(shí)測(cè)量中對(duì)敏感藻種造成光抑制效應(yīng)，影響連續(xù)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

因此，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測(cè)規(guī)程必須將光照控制置于核心地位。這要求：采樣時(shí)應(yīng)使用深色避光材料制成的樣品瓶，并盡快注入、充滿、密封；樣品在運(yùn)輸與保存過(guò)程中須全程避光，并置于低溫環(huán)境；實(shí)驗(yàn)室提取操作應(yīng)在柔光或暗室條件下進(jìn)行，使用棕色容量瓶，并盡可能縮短處理時(shí)間；對(duì)于儀器，需定期校準(zhǔn)，并確保檢測(cè)室避光良好。